Просмотр кода страницы Allium test

'''Allium test''' — растительная тест-система для оценки [[Мутагенез|мутагенного]], [[митоз]]модифицирующего и [[Токсичность|токсического эффектов]] факторов химической и физической природы на основе растения {{bt-latrus|Allium cepa|лук репчатый}} (сорт [[Штутгартен]]).

В '''Allium test''' используются корешки проростков репчатого лука ''Allium cepa'', который впервые предложен [[Шведская королевская академия наук|Шведской королевской академией наук]] как стандартный тест-объект<ref name="Arf95" /><ref name="Fisk85" />.

В современных исследованиях ''Allium cepa L.'' считается эталонным растительным тест-объектом для анализа мутагенности, митотоксичности и токсичности различных факторов<ref name="Arf95" /><ref name="Sharma83" />. Наряду с Allium test используются и другие тест-объекты (среди растений наиболее часто — горох ''Pisum sativum'' и бобы ''Vicia faba'').

Данный метод является простым, экономичным, быстрым и достаточно чувствительным для определения «[[мутаген]]» или «не мутаген» фактор, «цитотоксичен» или «не цитотоксичен».<ref name="ProKoFo05" />. Allium test рекомендован для исследования практически любых химических, физических и биологических факторов. По мере синтеза новых веществ тест получает новые рекомендации, что делает его одним из наиболее популярных.

Allium test рекомендован экспертами [[Всемирная организация здравоохранения|ВОЗ]] как стандарт в цитогенетическом мониторинге окружающей среды, так как результаты, полученные на данном тесте, показывают корреляцию с тестами на других организмах: водорослях, растениях, насекомых, в том числе и млекопитающих и человеке<ref name="Fisk85" /><ref name="Const82" /><ref name="WHO" /><ref name="PEST" /><ref name="WHO2" />. Рекомендован в качестве альтернативы генотоксикологическим тестам на лабораторных животных (в том случае если для одних и тех же исследуемых веществ наблюдается одинаковый результат в данном тесте и тестах на животных, то есть если показана корреляция)<ref name="FARMA" />

== История метода ==
История биотеста ''Allium test'' началась более 70 лет назад. Автор методики – академик Шведской Королевской Академии Наук, доктор Альберт Леван (1905–1998). Известен своими работами по цитогенетике, генотоксикологии, онкогенетике, а также тем, что в 1956 г. совместно с Джо Хин Тио определил хромосомный набор человека <ref name="Joe" />.

Альберт Леван шёл к созданию Allium test постепенно. В 1929–1937 гг. Леван изучал морфологию и набор хромосом у ряда представителей рода Allium <ref name="levan1929" /><ref name="levan1938" />. При этом он руководствовался трудами многих выдающихся учёных: Эдварда Регеля, Эдуарда Страсбургера, Генриха Шаффнера <ref name="Science" /><ref name="Science2" /> Георга Тишлера, Эмиля Хайца, Эдмунда Уилсона, Михаила и Сергея Навашиных, Григория Левицкого и многих других. Опираясь на их работы и на свои собственные труды, Альберт Леван сделал вывод, что идеальным объектом для детальных цитогенетических исследований является A. cepa. Главная причина, по которой был сделан выбор, заключается в том, что у данного вида «превосходное состояние хромосом» <ref name="levan1949" />. Луковицы быстро прорастают и легко доступны круглый год. Для изучения митоза он выбрал корневые меристемы <ref name="levan1931" />.

В 1937 г. в журнале Science выходит сенсационная статья А. Ф. Блэксли и А. Г. Айвери о новом методе, который позволяет получать ценные полиплоидные растения после обработки семян колхицином <ref name="Blakeslee" />. В том же году, в журнале Nature выходит работа Б. Р. Небеля, который независимо пришёл к тем же выводам <ref name="Nebel" />.

В 1938 г. Альберт Леван, развивая их идеи, проводит собственное исследование. В нескольких сериях экспериментов он воздействовал колхицином на корневые меристемы A. cepa и регистрировал к митоз – клетки значительно увеличивались в размерах, и происходило умножение количества хромосом. Визуальное проявление к митоза, которое он наблюдал – “опухолевидное” утолщение кончиков корней <ref name="levan1938" />. В 1945 г. Леван опубликовал статью в журнале Nature, в которой он показывает, что соли 25 металлов способны вызывать различные типы хромосомных аберраций в корневых меристемах у A. cepa. Им изучен эффект воздействия аценафтола, хлороформа, уксусно нафталиновой кислоты и многих других соединений. В 1949 г. Альберт Леван пишет о новом методе в цитогенетике и даёт ему название Allium test. Ранний вариант метода включал лишь анализ к митоза в профазах. В более поздних работах Альберт Леван начал регистрировать фрагменты и мосты, и выделил их в отдельную категорию “радиомиметических эффектов” <ref name="levan1949" /><ref name="NATURE" />. Леван считал, что результаты, полученные в Allium test, являются важным индикатором для более глубоких исследований по мутагенезу и канцерогенезу <ref name="levan1949" />.

Наряду с Леваном к идее о создании метода Allium test, аналогичным путём пришли и другие учёные. В 1941 г. Карл Сакс из Гарвардского Университета изучал влияние рентгеновских лучей на корневые меристемы A. cepa и регистрировал различные хромосомные нарушения <ref name="Karl" />. В 1948 г. Франциско Д`Амато из Пизанского Университета установил, что целый ряд химических соединений вызывает митотоксический эффект. Д`Амато разработал «тест на проростках лука» и вместе с коллегами исследовал цитогенетические эффекты более чем 40 химических веществ <ref name="amato" />. В том же году выходит статья Леона Вандерлина (1948), который пишет о митозах в корневых меристемах A. cepa, как о классической модели митоза в цитогенетике <ref name="vanderlyn" />.

В 1973 г. Шведская Королевская Академия Наук рекомендовала Allium test в качестве стандартного скрининг-теста. Основаниями для этого послужили его быстрота, экономичность и простота исполнения, а ещё «отличное состояние хромосом» у A. cepa L. Как сообщает В. Грант, к 1982 г. с помощью метода Allium test был исследован генотоксический потенциал более чем 148 химических соединений. На основании этого В. Грант делает вывод о необходимости включения Allium test в список стандартных генетико-токсикологических тестов, что и было сделано экспертами ВОЗ в 1985 г.<ref name="grant" />

В 1979-1985 гг. Г. Фискесджо, ученик А. Левана развивает и адаптирует метод для оценки различных химических соединений. Уделяет большое внимание не только учёту частоты хромосомных аберраций, но и измерению длины корней, как показателя токсического действия исследуемого фактора, который напрямую связан с микропараметрами. Фискесджо отмечает, что чувствительность Allium test практически не отличается от чувствительности теста на лимфоцитах человека <ref name="Fisk85" />.
Вот его собственная оценка данного метода:
* Растения легки для хранения и ухода, широко распространены и недорогие. Вообще, состояние хромосомы клеток растения — хорошее, поэтому обеспечивает высокое качество в контрольных условиях.
* Биотест ''Allium cepa'' является относительно быстрым, лёгким для выполнения испытаний, а также высокочувствительным и воспроизводимым. Это также обеспечивает сходимые результаты с целым рядом других тестовых систем.
* Как макроскопический, так и микроскопический эффекты, обладают хорошей [[корреляция|корреляцией]] между собой. Макроскопический эффект (сдерживание корневого прироста) является самым чувствительным параметром. Сдерживание прироста является следствием прямых или косвенных вредных эффектов. Микроскопическое исследование позволяет оценить повреждения хромосом и нарушения [[деление клеток|деления клеток]], и поэтому обеспечивает дополнительную информацию относительно остроты, механизма генотоксического эффекта или потенциальной мутагенности.
* Корневые клетки обладают определёнными [[фермент]]ами, выполняющими функции оксидаз, которые способствуют превращению многих не мутагенных веществ в мутагенные. Эта система активации позволяет обнаружить те химические вещества, которые усиливают свой токсический эффект в процессе метаболизма.
* Система имеет широкий ряд применений, например, для проверки химической чистоты питьевой, природной воды, а также промышленного ущерба и т. п., и полезен для оценки и классификации экологических химикатов с ссылкой на токсичность.
* Биотест может также использоваться для измерения относительной токсичности нерастворимых в воде соединений, при условии, что они могут быть растворены в подходящем растворителе, а затем разбавлены в воде таким образом, что остаточная концентрация не превысит определённых пределов. В таких случаях для контроля растворителей должен также быть организован тестовый режим. Биотест действует в широком диапазоне pH (3,5 — 11,0) без каких-нибудь очевидных эффектов на приросте корневых систем. Поэтому умеренно кислые/щелочные образцы воды, химические растворы, и т. п. могут быть исследованы без необходимой корректировки pH.
* Биотест с использованием ''Allium cepa'' высокочувствителен и может дать позитивные токсические эффекты в случаях, когда исследуемые пробы проверены в других системах (особенно высшие организмы, как например рыбы) и по их результатам не токсичны. Позитивные результаты в этой тестовой системе указывают потенциальный биологический риск. [[Экстраполяция]] результатов от одной тестовой системы к другой (и в конечном счете к человеку) должна быть основанной на результатах серии испытаний и с должным рассмотрением к метаболическим превращениям тестируемого образца.
* В сравнении с другими краткосрочным альтернативным биотестами на токсичность этот тест показал хорошую сходимость с результатами других тестовых систем, использующих множество других организмов, как эукариотов, так и прокариотов. Результаты таких сравнений описаны ниже<ref name="Fisk85" />:
:* В кольцевом тесте, где для изучения веществ использовались в качестве тестовых систем различные микроорганизмы независимыми лабораториями, те же самые вещества были предложены для тестирования и на Allium test-e. Среди этих микроорганизмов 16 различных морских [[водоросль|водорослях]] (зеленые морские водоросли и кремнёвые морские водоросли), [[дрожжи|дрожжах]] (Saccharomyces cerevisiae), простейших (Tetrahymena pyriformis) и микроорганизмы активного ила(сообщество [[бактерия|бактерий]], дрожжей и простейших). Результаты были в целом хорошо сравнимы, хотя были видимы некоторые отличия в чувствительности. Большинство морских водорослей были чувствительнее, чем Allium сера, тогда как дрожжи, простейшие и тест на активном иле были менее чувствительны.
:* Целый ряд водных растений и животных оказался менее чувствительным к определённым классам веществ сравнению с биотестом Allium например рыбы (''Gasterosteus aculeatus''), водные животные (''Daphnia magna'', ''Brachydario rerio'' — яйца или икра бактерии Microtox) и растения ([[одноклеточные]] морские водоросли). Другие животные (например. ''Nitocra spinipes'') и растения (напр. морские водоросли и одноклеточные) представляют сопоставимые результаты рассматриваемому биотесту
:* В исследованиях на бензопирен китайская система с использованием клеток [[хомяк]]а V79 без учёта метаболических эффектов системы активизации являются менее чувствительными, чем ''Allium сера''. Относительная чувствительность меняется с учётом влияния функций оксидаз. Несмотря на изменения в чувствительности общие результаты между двумя системами сравнимы.
:* Испытания, проведённые на человеческих [[лимфоцит]]ах, которые оказались немного более чувствительными к эффектам органических ртутных соединений, чем клетки [[меристема|меристемы]] корней ''Allium cepa'', в целом однотипны. Изучение микроскопических параметров обеих клеток дают подобный эффект (c-[[митоз]]).
:* Биотестирование с помощью ''Allium сера'', в данном случае, является лучшим методом определения [[экологический риск|экологического риска]] за счёт его высокой чувствительности.

Дж. Ранком и М.Г. Нельсоном (1993) была предложена модификация ана-телофазного анализа, в котором определяются три типа хромосомных нарушений: фрагменты, мосты и отставания хромосом. Авторы рекомендовали использовать луковицы A. cepa сорта Штутгартен-Ризен <ref name="rank1993" />. Дж. Ранк (2003) показывает 82% корреляцию между чувствительностью Allium test и тестом на грызунах по отношению к химическим веществам (в частности к пестицидам). Также он отмечает, что чувствительность Allium test при исследовании сточных вод выше, чем в тесте Эймса <ref name="rank2003" />.

В 1995 г. Т.-Х. Ма была предложена модификация, в которой мутагенный эффект оценивался путём учёта частоты микроядер <ref name="ma" />. Совместный анализ хромосомных аберраций и микроядер был предложен Д. М. Леме и М. А. Марин Моралес (2008) как существенный показатель прямого действия химического фактора на ДНК <ref name="leme2" />. Аналогичный метод в 2013 г. был предложен Д. С. Песня и А. В. Романовским для оценки генотоксического и цитотоксического эффекта электромагнитных излучений <ref name="pluto" />.
Статистическую стандартизацию Allium test произвёл А. Барберио с соавт. (2011). Они проанализировали более 50 исследований, которые были проведены с использованием методики Allium test. На основании анализа этих данных авторы рекомендовали для каждой серии экспериментов использовать выборку в 3 луковицы по 3 корешка от каждой <ref name="WATER2" />.

Все большую популярность приобретает использование «современного» варианта Allium test в сочетании с методом ДНК-комет для оценки генетических повреждений. Метод был предложен в 1997 г. Наваррете с соавт <ref name="Navarrete" />. Позднее было установлено, что в Allium test чувствительность метода ДНК-комет, ана-телофазного анализа и микроядерного теста совпадают, поскольку дают положительный результат при тестировании одних и тех же веществ <ref name="Seth" /><ref name="Yildiza" />. Применение метода ДНК-комет в Allium test рекомендовано для оценки генотоксического потенциала прямых и косвенных мутагенов <ref name="Bandyopadhyay" />.

В настоящее время термин Allium test используется наряду с постоянно увеличивающимся числом объектов и при этом продолжает оставаться одним из наилучших тест-объектов для анализа генотоксичности различных факторов.

== Преимущества ==

=== Преимущества растительной тест-системы ''Allium cepa''. Преимущества Allium test перед другими методами ===
Данный метод не требует знания кариотипа и идентификации типов повреждений хромосом, является простым, экономичным и достаточно чувствительным для определения «мутаген» или «не мутаген» фактор<ref name="ProKoFo05" />.

Метод позволяет регистрировать хромосомные [[мутация|мутации]] типа делеций и транслокаций, следствием которых является наличие мостов и фрагментов в [[Анафаза|ана-]] и [[Телофаза|телофазе]]. Метод позволяет выявлять изменение поведения хромосом на [[веретено деления|веретене деления]]<ref name="ProKoFo05" />. Allium test идеально подходит для проведения микроядерного теста.

:* Известный и распространённый тест Эймса по чувствительности и достоверности результатов значительно уступает Allium test при оценке загрязнений<ref name="Umu" />. Кроме того Allium test был рекомендован для тестирования образцов различных наноматериалов, тогда как тест Эймса оказался неприемлемым в связи с ложноотрицательными результатами<ref name="OECD" />.
:* Исследование мутагенных свойств наночастиц диоксида титана на корневых меристемах ''Allium cepa'' и лимфоцитах человека показало, что оба теста проявляют сходную чувствительность к данному веществу<ref name="NANO2" />.
:* При изучении генотоксического потенциала соединений никеля было показано, что Allium test также высокочувствителен к ним, как лимфоциты и фибробласты человека<ref name="INPS" />.

=== Преимущества растительных тестовых систем на примере лука ''Allium cepa'' ===
Растительные тест-системы в настоящее время получают всё большее распространение при оценке мутагенного [[Загрязнение окружающей среды|загрязнения окружающей среды]]. Это обусловлено целым рядом преимуществ растений как индикаторов генотоксичности различных факторов, так и сигнальных объектов при генетическом мониторинге за состоянием окружающей среды:
* Растения — неизменный объект для натурных исследований антропогенного влияния на окружающую среду: первыми принимают на себя удар загрязнителей, не мигрируют подобно животным, что позволяет чётко рассчитать время воздействия.
* Растения — [[Эукариоты|эукариотические организмы]], поэтому на них, в отличие от микроорганизмов, можно регистрировать все типы генетических повреждений:
:* генные,
:* хромосомные,
:* геномные.
* Методы работы с растительными объектами экономичны, требуют минимального количества оборудования и [[реактив]]ов, выращивание растений менее трудоёмко, чем выращивание животных<ref name="Pro03-5" />.
* Можно получать материал нужных стадий.
* Эксперименты можно вести в строго контролируемых условиях — как в острых, так и в хронических опытах (от нескольких часов до нескольких лет).
* Данные по мутагенезу ряда факторов на растительных объектах показывают хорошую корреляцию с результатами тестирования на животных.
* Растения позволяют регистрировать как прямые, так и косвенные мутагены.
* Только растения позволяют выявить такой важный класс мутагенов, как [[химические соединения]], приобретающие мутагенность в процессе метаболической активации растительными [[фермент]]ами.
* Некоторые факторы, высокая токсичность которых не позволяет учесть генетические повреждения на животных, могут быть оценены как мутагены только в растительных тест-системах.
* Растения могут выращиваться непосредственно на месте оценки суммарного генетического эффекта загрязнения определяемых участков<ref name="IMPro88" />.
* Данные полученные на растительных тест-системах показывают хорошую корреляцию с данными тестов на млекопитающих. Более того, высшие растения проявляют себя в экосистеме как стабильный биосенсор и, таким образом позволяют отследить эволюцию генотоксического воздействия (в том случае когда фактор проявляет мутагенный эффект одновременно на растительном и животном тестовых объектах)<ref name="PLANT" />.

== Характеристика лука ''Allium cepa'' L., применимость в тестах ==
''Allium cepa L.'' (отдел ''Angiospermae'', класс ''Liliopsida'', подкласс ''Lilidae'', порядок ''Liliales'', семейство ''Alliaceae'', род ''Allium L.'') в качестве тестового объекта широко применяется для оценки генетического потенциала{{термин}} химических соединений, природных и сточных вод<ref name="Sharma83"/>. Лук имеет 16 хорошо прокрашиваемых хромосом (2n=16)<ref name=Pro03-5/>. Продолжительность клеточного цикла составляет примерно 17,8 часа<ref name="Ivanov71"/>. Митотический индекс может колебаться в разных корнях одного и того же растения, но усреднённые данные являются достаточно устойчивыми. Продолжительность митоза в разных тканях корня ''Allium cepa'' одинакова и не меняется по длине корня. Соотношение различных фаз митоза не зависит от времени фиксации.

Тесты с использованием меристематических тканей проростков корешков лука позволяют регистрировать токсические (прирост корешков), митозмодифицирующие (нарушение митотической активности меристемы, [[патология]] веретена деления) и мутагенные эффекты (индукции микроядер и хромосомные мутации)<ref name="Sharma83"/>.

Наиболее часто применяется анализ частоты хромосомных аберраций в [[Анафаза|ана]]-[[Телофаза|телофазе]] митоза [[Ана-телофазный метод анализа хромосомных аберраций|(ана-телофазный тест)]]. В этом тесте регистрируются хромосомные мутации типа делеций и транслокаций, а также нарушения веретена деления по частоте отставания хромосом, многополюсных и асимметричных митозов. Ана-телофазный метод с использованием лука в качестве тестового объекта рекомендован в качестве тестового объекта природных сред. При сравнении мутагенной активности химических загрязнителей, определённых в других токсикогенетических тестах с ана-телофазным методом установлено, что чувствительность его высока и составляет 82 %.

Однако учёт только хромосомных аберраций может привести к занижению реального генотоксического эффекта, например, по следующим причинам. Во-первых, эти методы не позволяют регистрировать генные мутации, которые возникают значительно чаще хромосомных. Во вторых, хромосомные мутации выявляются, как правило на фоне высокой митотической активности меристематических клеток. Повышенная токсичность факторов среды может вызывать снижение количества делящихся клеток за счёт задержки [[клеточный цикл|клеточного цикла]] в точках контроля, либо гибели части клеток, следовательно при этом искусственно снизится и частота регистрируемых хромосомных повреждений.

Точки контроля клеточного цикла (checkpoints) представляют собой периоды цикла, где происходит проверка точности выполнения предыдущей стадии. Такой механизм предохраняет делящиеся клетки от летального митоза, останавливая деление и давая время системе репарации для восстановления повреждений ДНК. Когда контролирующий механизм обнаруживает повреждённую или не реплицированную ДНК происходит задержка в клеточном цикле, в течение которого происходит корректировка. Точками контроля являются переходы G1-S и [[G2-фаза|G2]]-M. Существует также особая точка контроля при переходе от метафазы в [[анафаза|анафазу]]. Увеличение количества нарушений при воздействии генотоксикантов приводит к задержке клеточного цикла в точках контроля, что отражается на количестве делящихся клеток и на продолжительности фаз клеточного цикла.

Как следствие, для уменьшения возможных ложноотрицательных ответов при выявлении генотоксических и канцерогенных факторов удобно использовать такой показатель как митозмодифицирующая активность изучаемого фактора, которая определяется по уровню митотической активности ткани и относительной длительности фаз митоза. Исследование митозмодифицирующей активности позволяет выявить ранние изменения цитогенетической системы организма, вызванные комплексом различных нарушений.

Митозмодифицирующий эффект в меристеме корня растений исследуется параллельно с определением частоты хромосомных аберраций. Следовательно, в одном тесте можно зарегистрировать широкий спектр нарушений генетических структур и генетических процессов, что упрощает исследование и уменьшает затраты на его проведение<ref name="Tarasov94"/>.

Таким образом использование растительной тест-системы позволяет не только сказать о количественном воздействии изучаемого факторы на живой объект, но и определить характер воздействия по поражаемым участкам генетического материала.

Для тестирования подходят факторы различной природы (см. таблицу):

{| class="wikitable"
|-
!Физический фактор:
|
* Радиация. В 50-х Карл Сакс показал, что рентгеновские лучи способны индуцировать большое количество хромосомных мутаций в клетках кончиков корней у лука. Известны работы [[Гродзинский, Дмитрий Михайлович|Гродзинского]], который показал в Allium test, что уровень радиации в чернобыльской зоне отчуждения достаточен для возникновения генетических нарушений и повышенный уровень нарушений будет наблюдаться на протяжении нескольких поколений после воздействия (ионизирующее излучение)<ref name="Karl" /><ref name="pluto" /><ref name="Grodz" />
* Ультрафиолетовое излучение
* [[Инфракрасное&nbsp;излучение]]:
** Температура
* Радиоизлучение (неионизирующее излучение):
** УВЧ-излучение. В частности излучение GSM-диапазона сотовых телефонов. Показано, что излучение обычных сотовых телефонов (режим разговора) при длительном воздействии (1-3 часа) способно вызывать хромосомные мутации в количестве, сравнимом с тем, которое вызывает {{прояснить|20-минутное облучение плутонием-239}}<!-- масса, расстояние? -->. Аналогичные эффекты вызывало излучение 400 и 900 МГц, создаваемое приборами-эмуляторами. Allium test рекомендован в качестве цитогенетического метода для оценки эффектов радиочастотных излучений<ref name="pluto" /><ref name="RomanPesnya" /><ref name="PesnyaRoman"/><ref name="PesRom" /><ref name="Ciferka" />
|| В случае с физическим мутагенным фактором луковицы подвергаются воздействию фактора с прочими одинаковыми условиям среды, как в контроле
|-
!Химический фактор:
|
* Различные химические соединения или [[растворы]] веществ<ref name="OIA" /><ref name="NDEA" />.
** Растворы различных солей. В 1945 году Альберт Леван опубликовал статью в Nature о генотоксических эффектах солей лития, бериллия, натрия, калия, хрома, железа, кобальта, никеля, меди, мышьяка, рубидия, иттрия, палладия, кадмия, бария, лантана, неодима, эрбия, церия, золота, ртути, таллия, свинца, висмута и тория<ref name="NATURE" />
** Allium test был предложен для тестирования различных наночастиц.<ref name="NANO" /><ref name="NANO3" />,
** Фармацевтических и лекарственных препаратов<ref name="FARMA" /><ref name="FARMA2" /><ref name="Inula" /> <br>(например [[талидомид]]а)<ref name="NATURE3" />
** Некоторых красителей<ref name="NATURE4" />
** Пестицидов<ref name="PEST" />
* Природных и антропогенных сред:
** Природные воды: реки, озера<ref name="WATER2" />
** Промышленные выбросы/сточные воды<ref name="WATER" />
** Шахтных вод, нарушенных экосистем в местах добычи полезных ископаемых<ref name="Coal" />
|| В случае с химическим мутагенным фактором луковицы проращиваются на растворе или [[концентрированный раствор|концентрированном растворе]] химического вещества и воды в заведомо определённой концентрации. Контроль проращивается на воде без добавления химического мутагенного фактора
|-
!Биологический фактор:
|
* Продукты жизнедеятельности организмов
** Биотоксины (напр. охратоксин А, продуцируемый некоторыми плесневыми грибами)<ref name="BIOTOX" />
** Гормоны<ref name="BIOTOX2" /><ref name="NATURE2" />
** Allium test рекомендован для биомониторинга водоёмов в период «цветения» синезелёных водорослей<ref name="Blue" />
| Аналогично предыдущему
|}

== Методика проведения тестирования ==

=== Подготовка оборудования для тестирования ===
;Аппаратура и материалы:
чашки Петри, цилиндры мерные (25 и 100 мл), пенициллиновые флаконы или аналогичные ёмкости на 20 мл с глубоким дном, стёкла предметные и покровные, бюксы (15, 25 и 100 мл), пипетки мерные (1,0; 2,0; 10,0), пипетки глазные, лупы стереоскопические МБС-9, микроскопы<ref name="Pro03-12" />.

==== Химические реактивы ====
{| class="wikitable"
|-
! Ацетоорсеин<br>2 %
|| 2 г орсеина растворяют в 100 мл горячей 45%-ой уксусной кислоты, доводят до тайного кипения (вскипание не допустимо) и фильтруют. Используется для окраски корешков
|-
! Фиксатор Кларка
|| смесь 96 % [[этиловый спирт|этилового спирта]] и ледяной [[Уксусная кислота|уксусной кислоты]] в соотношении 3:1. Используется для фиксации корешков.
|-
! Спирт<br>70 %
|| смесь 96 % [[этиловый спирт|этилового спирта]] и дистиллированной воды. Используется для долговременного хранения корешков
|-
!Уксусная кислота<br>40-45 %
|| смесь ледяной [[Уксусная кислота|уксусной кислоты]] и дистиллированной воды. Используется для приготовления препаратов
|}

=== Подготовка материала ===

==== Подготовка луковиц ====
Выберите луковицы для исследования. Выборка должна быть однородной как в контрольном, так и в опытном вариантах опыта. Средняя масса севка — 10-20 г, диаметром 1,5-2 см. Выбранные луковицы не должны быть пересушены. Это можно понять, сняв лишнюю шелуху, которая к тому же может мешать проведению опыта. До начала эксперимента у луковиц не должно быть проклюнувшихся зелёных ростков листьев.

==== Подготовка фактора мутагенеза и процедура тестирования ====
Существует два варианта Allium test: оригинальный и модифицированный:
* '''В оригинальном варианте''' теста луковицы помещают для проращивания корешков в чистую воду (прим: автор допускает использование водопроводной воды. Следует взять во внимание тот факт, что в Швеции, откуда родом автор, водопроводная вода действительно очень чистая. Как вариант, можно использовать очищенную питьевую воду низкой минерализации). По достижении корешками 1-2 см луковицы переносят в ёмкости с исследуемым раствором на определённое время (от 2 часов в случае с раствором колхицина до 3 дней). Оригинальный вариант наиболее удобен при тестировании физических факторов.
* '''В модифицированном варианте''' теста луковицы помещают непосредственно в исследуемый раствор без предварительного проращивания корешков. Данный вариант чаще используется при тестировании химических веществ<ref name="Pro03-12" />.

Для чистоты эксперимента допустимо использование дистиллированной воды. При этом луковица будет расти за счёт внутренних питательных резервов на протяжении всего эксперимента не испытывая угнетённости. В экспериментах, где исследуются химически активные вещества, предпочтительно использовать дистиллированную воду, чтобы избежать образования других соединений. Ограничение тут в том, что дистиллированная вода является физиологически неполноценной и в целом ряде других тестов её использование затруднительно. Однако и в контроле, и в опыте в этом случае ущерб от дистиллированной воды будем считать равным, как и прочие фоновые условия.<br>
Луковицы проращиваются от 3 до 4 дней. Желательно использовать ёмкости диаметром 1,5 см и высотой 10 см, чтобы по мере роста корни не упирались в дно ёмкости, в которой они находятся. Иначе это может приводить к некоторым биологическим эффектам — реакция меристемы на препятствие. Для проведения ана-телофазного анализа берут часть корешка длиной около 1 см. Проводят процедуру фиксации (для долговременного хранения). При необходимости корешки отмывают от фиксатора в воде, затем окрашивают ацеторсеином согласно стандартной методике. Для микроскопирования используют кончик корня длиной 1-2 мм — зона активного деления меристематических клеток.

==== Обработка материала после проведения эксперимента ====

===== Фиксация =====
Для фиксации корешки помещают в ёмкости с фиксатором Кларка (см.выше). Ёмкости герметично закрывают и оставляют для фиксации клеток на 1-2 дня. Затем материал промывают два раза от фиксатора в 70 % спирте, и помещают в ёмкости с 70 % спиртом для долговременного хранения. Спирт должен превосходить материал по объёму в 4-5 раз.<ref name="Pro03-14-15" /><ref name="Pro03-17" /><ref name="Pro03-13" />

===== Окрашивание материала =====
Окраску корешков производят 2 % ацетоорсеином (см. выше). Корешки отмывают от спирта в воде (удобно в чашках Петри). Материал переносят в небольшие фарфоровые тигли с держателем, которые на 2/3 заполняют красителем. Тигель накрывают предметным стеклом. Нагревают над пламенем спиртов до тайного кипения (запотевание покровного стекла). Тигель с материалом оставляют на некоторое время для прокрашивания хромосом (от 2 часов до 1 суток). После этого можно готовить препараты для микроскопирования.<ref name="Pro03-14" />

==== Методика приготовления препаратов для микроскопического анализа ====
Готовят временные давленые препараты корневых меристем. Для этого от окрашенного корешка лезвием отрезают кончик меристемы длинной 2-3 мм (кончик отличается по более тёмной окраске и утолщением), помещают на предметное стекло в каплю 45 % уксусной кислоты, накрывают покровным стеклом и с помощью спички аккуратно раздавливают до получения монослоя клеток.
Препараты анализируют под микроскопом при увеличении 12,5×1,5×40. На препаратах рассматривают мелкие, округло-квадратной формы клетки с хорошо прокрашенными ядрами и неповреждёнными клеточными стенками.<ref name="Pro03-14-15" />

=== Скрининг-тест ===
Перед генетическим анализом следует провести первичный скрининг-тест, который сразу покажет обладает ли фактор выраженной биологической активностью. Основным и наиболее важным изучаемым макропараметром является рост корней. Но помимо него могут ещё изучаться другие параметры:
* Тургесценция. Твёрдость кончиков корней связана со степенью токсичности фактора. При высокой токсичности фактора тургесценция падает, что может привести к гибели корней.
* Изменение цвета. В течение эксперимента может меняться цвет корей и причина тому — содержание в воде определённых солей (например сине-зелёный от медного купопроса). Кроме того кончики корней могут стать коричневыми, что связано с токсическим эффектом фактора, вызывающим клеточную смерть.
В качестве стандартных исследуются следующие параметры:
* Форма корней. Разбухание кончиков корней после 4-5 дней воздействия, свидетельствует об особом типе нарушения с-митозе. Изгиб корней или их кончиков происходит как правило после воздействия растворов определённых солей.
* Длина корней. Это значение средней длины корней (для 1 луковицы).

==== Методика измерения длины корней ====
Измерить длину корней можно двумя способами:
* Обычно длина корневой системы измеряется снаружи ёмкости с помощью рулетки (измерение для каждой луковицы). При это регистрируется максимальная достигнутая длина корней (не учитывая более короткие корни) для каждой луковицы. Затем вычисляется среднее по всей выборке луковиц (от 3 до 5 штук) в варианте опыта. Этот метод позволяет проводить измерения в течение эксперимента.
* Более точным является второй способ. По окончании эксперимента корни срезаются у луковицы под основание, измеряется длина каждого корешка, вычисляется среднее значение (среднее значение для каждой луковицы). Повреждённые корни не учитываются. Затем устанавливается среднее значение длины корней для всей выборки луковиц.

==== Вычисление параметра корневого прироста ====
Можно осуществить двумя способами:
* Рассчитывается средняя длина корней для каждой луковицы в опытных и контрольных сериях экспериментов. Затем вычисляется общее среднее значение длины для опытной серии и контрольной. Вычисляется во сколько раз длина корней в опытной серии больше/меньше чем в контрольной и выражается в процентах. Статистическую обработку результатов проводят с использованием [[Дисперсионный анализ|дисперсионного анализа]] и/или [[Критерий Стьюдента|критерия Стьюдента]].
* Можно вычислять среднее сразу в целом по каждому варианту эксперимента (то есть не вычисляя среднего значения для конкретной луковицы, поскольку вся группа луковиц находилась в однородных условиях). Для сравнения суммарных выборок по опыту и контрольной можно использовать дисперсионный анализ и критерий Стьюдента.

Изменение длины корней в Allium test-е является показателем токсичности. Это очень чувствительный показатель, который легко регистрируется визуально и не требует никаких специальных реактивов и аппаратуры, хорошо коррелирует с микроскопическими параметрами и потому предложен в качестве краткосрочного скрининг-теста. Если происходит значительное угнетение роста корней по сравнению с контролем, то отмечают токсический эффект воздействующего фактора. В случае значительного прироста корней, говорят о стимулирующем эффекте.

== Микроскопические исследования и статистическая обработка ==
[[Файл:Микроядра.jpg|thumb|right|Два микроядра в меристеме ''Allium cepa'', образованные ацентрическими фрагментами]]

=== Расчет частоты мутаций ===
В Allium test для расчёта частоты мутаций традиционно применяется метод [[ана-телофазный анализ|ана-телофазного анализа]] частоты хромосомных аберраций. На стадии [[Анафаза|ана-]] [[Телофаза|телофазы]] регистрируются мутации, связанные с грубым нарушением структуры хромосом, а также с повреждением митотического веретена (веретена деления) или изменением поведения хромосом на веретене деления<ref name="Pesnya"/>:
* отставания хромосом,
* аберрантные митозы:
** трёхполюсные митозы,
** четырёхполюсные митозы,
** несимметричные (асимметричные) митозы<ref name=Pro03-5/>.

==== Рекомендации ====
При оценке мутагенной активности химических веществ достаточно использовать лишь [[ана-телофазный анализ]], то есть регистрировать мутации в фазах митоза, так как меристемы в течение всего опыта находятся в контакте с воздействующим фактором. Но при изучении мутагенной активности ЭМИ этого оказалось недостаточно, поскольку воздействию излучения корневые меристемы подвергаются лишь некоторый период времени. В промежутках между облучениями происходит преобразование индуцированных в анафазе и телофазе хромосомных фрагментов — клетки выходят из митоза и переходят в интерфазу, а фрагменты становятся микроядрами. В результате эти мутации остаются неучтенными. В связи с этим была предложена модификация метода Allium test, которая позволяет учитывать всю сумму мутаций. На одном препарате было рекомендовано применять [[ана-телофазный анализ]] и микроядерный тест. При этом анализируется вся совокупность клеток (делящиеся и не делящиеся), что позволяет избежать ложноотрицательных ответов и даёт более достоверные результаты<ref name="PesnyaRoman" />.

=== Расчет митотического и фазных индексов ===
Расчёт [[Митотический индекс|митотических индексов]] можно проводить на тех же препаратах, что и [[ана-телофазный анализ]]. Просматривается от 400 до 600 клеток (больше — лучше). Подсчитывается общее количество делящихся клеток и отдельно клетки на разных стадиях [[митоз]]а.

{| class="wikitable"
|-
! Обозначение [[Фаза деления|{{comment|фазы|Фазы деления}}]] / [[Фазный индекс|{{comment|индекса|Фазного индекса}}]]!! Характеристика !! Расчёт [[фазный индекс|индекса]]
|-
!
: / '''[[Mitotic index|MI]]'''
||
:: '''[[Mitotic index|MI, %]]''' — [[Митотический индекс|митотический]] (mitotic) [[Митотический индекс|индекс]]
: ''[[Митотический индекс]]'' — процент делящихся клеток от общего числа проанализированных клеток.
||
<center><math>Mi=\frac\mbox{(P+M+A+T)}\mbox{N}*100\%</math></center><br>
<br>, где '''(P+M+A+T)''' — сумма клеток, находящихся на стадии [[Профаза|профазы]], [[Метафаза|метафазы]], [[Анафаза|ана]]- и [[Телофаза|телофазы]], а '''N''' — общее число проанализированных клеток.
|-
!
: '''[[Профаза|П]]''' / '''[[Профазный индекс|ПИ]]'''<ref name="Pro03-21" />
||
[[профаза]]
:: '''[[Профазный индекс|ПИ, %]]''' — [[профазный индекс]]
: ''[[Профазный индекс]]'' — процент клеток в [[профаза|профазе]] [[митоз]]а от общего числа проанализированных клеток
||
<center><math>\mbox{Pi}=\frac\mbox{P}\mbox{(P+M+A+T)}*100\%</math></center><br>
<br>, где '''(P+M+A+T)''' — сумма клеток, находящихся на стадии [[Профаза|профазы]], [[Метафаза|метафазы]], [[Анафаза|ана]]- и [[Телофаза|телофазы]], а '''P''' — количество профаз в просчитанных клетках
|-
!
: '''[[Метафаза|М]]''' / '''[[Метафазный индекс|МИ]]'''<ref name="Pro03-21" />
||
[[метафаза]]
:: '''[[Метафазный индекс|МИ, %]]''' — [[метафазный индекс]]
: ''[[Метафазный индекс]]'' — процент клеток в [[Метафаза|метафазе]] [[митоз]]а от общего числа проанализированных клеток
||
<center><math>\mbox{Mi}=\frac\mbox{M}\mbox{(P+M+A+T)}*100\%</math></center><br>
<br>, где '''(P+M+A+T)''' — сумма клеток, находящихся на стадии [[Профаза|профазы]], [[Метафаза|метафазы]], [[Анафаза|ана]]- и [[Телофаза|телофазы]], а '''M''' — количество [[Метафаза|метафаз]] в просчитанных клетках
|-
!
: '''[[Анафаза|А]]''' / '''[[Анафазный индекс|АИ]]'''
||
[[анафаза]]
:: '''АИ, %''' — анафазный индекс
: ''[[Анафазный индекс]]'' — процент клеток в [[Анафаза|анафазе]] [[митоз]]а от общего числа проанализированных клеток
||
<center><math>\mbox{Ai}=\frac\mbox{A}\mbox{(P+M+A+T)}*100\%</math></center><br>
<br>, где '''(P+M+A+T)''' — сумма клеток, находящихся на стадии [[Профаза|профазы]], [[Метафаза|метафазы]], [[Анафаза|ана]]- и [[Телофаза|телофазы]], а '''А''' — количество [[Анафаза|анафаз]] в просчитанных клетках
|-
!
: '''[[Телофаза|Т]]''' / '''[[Телофазный индекс|ТИ]]'''
||
[[телофаза]]
:: '''ТИ, %''' — телофазный индекс
: ''[[Телофазный индекс]]'' — процент клеток в [[Телофаза|телофазе]] [[митоз]]а от общего числа проанализированных клеток
||
<center><math>\mbox{Ti}=\frac\mbox{T}\mbox{(P+M+A+T)}*100\%</math></center><br>
<br>, где '''(P+M+A+T)''' — сумма клеток, находящихся на стадии [[Профаза|профазы]], [[Метафаза|метафазы]], [[Анафаза|ана]]- и [[Телофаза|телофазы]], а '''Т''' — количество [[Телофаза|телофаз]] в просчитанных клетках
|-
!
: '''А-Т''' / '''А-ТИ'''
||
ана- телофаза
:: '''А-ТИ, %''' — ана- телофазный [[Фазный индекс|индекс]]
: ''Ана- телофазный [[Фазный индекс|индекс]]'' — процент клеток в [[Анафаза|анафазе]] и [[Телофаза|телофазе]] [[митоз]]а от общего числа проанализированных клеток
||
<center><math>\mbox{A-Ti}=\frac\mbox{(A+T)}\mbox{(P+M+A+T)}*100\%</math></center><br>
<br>, где '''(P+M+A+T)''' — сумма клеток, находящихся на стадии [[Профаза|профазы]], [[Метафаза|метафазы]], [[Анафаза|ана]]- и [[Телофаза|телофазы]], а '''А+Т''' — количество [[Анафаза|ана]]- и [[Телофаза|телофаз]] в просчитанных клетках
|}

== Статистическая обработка данных ==

=== Статистические методы ===
{{Дополнить раздел|дата=2011-06-16}}
{{Врезка|Выравнивание=right|Ширина=300px|Заголовок=Среднее арифметическое|Содержание=
Вариантным является каждый корешок. Если вариант меньше 30, следует пользоваться прямым способом: все варианты суммируются и полученная сумма делится на число вариант:
<center><math>\overline X = \frac {X_1 + X_2 + X_3 + \dots}{n} = \frac {\Sigma X}{n}</math></center>, где {{math|Σ''X''}} — сумма вариант,<br>''{{math|n}}'' — здесь и далее количество проанализированных вариантов (корешков, микроскопических препаратов).
}}Полученные интегральные данные о фазных индексах подвергают статистической обработке. Обработку проводят по формулам для малых выборок ''(см. среднее арифметическое)''.

{{Врезка|Выравнивание=right|Ширина=300px|Заголовок=Среднее квадратическое отклонение σ|Содержание=
Для малых выборок σ рассчитывается по формуле:
<center><math>\sigma=\pm \sqrt{\frac{\Sigma(X_i-\overline X)}{(n-1)}}</math></center>
}}''Среднее квадратичное отклонение'' (σ) характеризуется разнообразием признаков. Оно учитывает отклонение от среднеарифметической каждой варианты. Поэтому σ является наилучшим показателем разнообразия признака.

{{Врезка|Выравнивание=right|Ширина=300px|Заголовок=Средняя ошибка для оценки достоверности средней арифметической|Содержание=
Для малых выборок:
<center><math>m=\pm\frac{\sigma}{\sqrt n}</math></center>
, где ''{{math|m}}'' — ошибка среднего,<br>σ — среднее квадратичное отклонение}}Средние арифметические, характеризующие действие изучаемого вещества на митотическую активность клеток меристемы ''Allium cepa'', рассчитаны для небольшого числа повторностей. Достоверность для всей генеральной совокупности устанавливается при помощи средней ошибки (''{{math|m}}'').

Величина средней ошибки находится в обратной зависимости от n. Таким образом, чем больше повторностей опыта исследуется, тем меньше ошибка {{overline|{{math|X}}}}.<br>Величину {{overline|{{math|X}}}} следует записывать с величиной его ошибки:

{| class="wikitable" aligin="center"
|-
! Обозначение !! Пример !! Вид графика
|-
| <center><math>\overline X \pm m</math></center> || <center>5 ± 0,5 %</center> || [[Файл:XAM.png|center|XAM]]
|}

{{Врезка|Выравнивание=right|Ширина=300px|Заголовок=Число степеней свободы|Содержание=<center><math>\mathsf\nu=n-1</math></center>}}Нахождение показателя достоверности разницы осуществляется в несколько этапов. Вычисляется ''число степеней свободы''.

{{Врезка|Выравнивание=right|Ширина=300px|Заголовок=[[t-критерий Стьюдента]]|Содержание=<center><math>td=\frac{\overline x_0 - \overline x_k}{S_d}</math></center><br>, где {{math|{{overline|X}}{{sub|0}}}} — среднее арифметическое опытного варианта,<br>{{math|{{overline|X}}{{sub|k}}}} — среднее арифметическое контрольного варианта,<br>{{math|S{{sub|d}}}} — ошибка отклонения, которая определяется при {{math|n{{sub|1}}<math>\not=</math>n{{sub|2}}}}}}Далее следует сравнить рассчитанные средние арифметические значения индекса (показателя) контрольного и опытного вариантов. {{overline|{{math|X}}}} двух сравниваемых групп, даже взятых из одной генеральной совокупности, всегда могут в какой-то мере отличаться друг от друга. Для чего выясняем, являются ли различия между средними арифметическими контрольного и опытных вариантов достоверными, или же это различие случайно. Для выяснения вопроса можно воспользоваться ''[[t-критерий Стьюдента|t-критерием Стьюдента]]''.

{{Врезка|Выравнивание=right|Ширина=400px|Заголовок=Ошибка отклонения|Содержание=при {{math|n{{sub|1}}≠n{{sub|2}}}}<center><math>S_d=\sqrt{\frac{\Sigma(x_i-\overline x_0)^2+\Sigma(x_i-\overline x_k)^2}{n_0+n_k-2}{\left (\frac{1}{n_0}+\frac{1}{n_k}\right )}}</math></center>, если {{math|n{{sub|1}}}}={{math|n{{sub|2}}}}
<center><math>S_d=\sqrt{(m_0^2+m_k^2)}</math></center>}}

Более подробно в методическом пособии.<ref name="Pro03-15-21" />

<center><math>\mbox{XA}, \%=\frac{n}{(\mbox{A}+\mbox{T})}*100</math></center>

=== Программно-статистические методы ===
{{Дополнить раздел|дата=2011-06-16}}
Проводится с использованием математических пакетов ([[Statistica]], [[Excel|MS Excel]], [[LibreOffice]] [[OpenOffice.org Calc|Calc]] и [[Шаблон:Электронные таблицы|др.]]). Для статистического анализа данных, полученных методом Allium test (частота [[Хромосомные аберрации|хромосомных аберраций]] и [[Микроядерный тест|микроядер]], [[Фазный индекс|фазных индексов]] и т. д.) можно использовать самовычисляющую электронную таблицу, совместимую с [[Excel|MS Excel]] или [[OpenOffice.org Calc|LO Calc]].

В таблице есть возможность эффективно группировать данные на листе, предоставляя выходные данные в удобном для последующей обработки и использования, виде, а также в будущем наращивать функционал таблицы под специфические задачи или при расширении обсчитываемых параметров теста<ref name="Roman"/>.

== См. также ==
* [[Хромосомные перестройки]]
** [[Ана-телофазный метод анализа хромосомных аберраций|Ана-телофазный анализ]]
** [[Метафазный анализ]]
** [[Метод ДНК-комет]]
** [[Микроядерный тест]]
* [[Митоз]]
** [[Митотический индекс]]
* [[Vicia test]]

== Примечания ==
{{примечания|33em|refs=
<ref name="Arf95">{{книга|автор=Арефьев В.А., Лисовенко Л.А.|часть=|заглавие=Англо-русский толковый словарь генетических терминов|оригинал = |ссылка = |ответственный = |издание = |место = |издательство = ВНИРО |год = 1995 |том = |страницы = |страниц = 407 |серия = |isbn = |тираж = }}</ref>
<ref name="Fisk85">{{статья|автор=Fiskesjо G.|заглавие=The Allium Test as a standard in environmental monitoring|оригинал=|ссылка=https://archive.org/details/sim_hereditas_1985_102_1/page/99|автор издания=|издание=Hereditas|тип=|место=|издательство=|год=1985|выпуск=|volume=102|номер=|pages=99-112|isbn=}}</ref>
<ref name="Sharma83">{{статья|автор=Sharma C.B.|заглавие=Plant meristems as monitors of genetic toxicity of environmental chemicals|оригинал=|ссылка=|автор издания=|издание=Current science|тип=|место=|издательство=|год=1983|выпуск=|том=52|номер=81|страницы=1000—1002|isbn=}}</ref>
<ref name="ProKoFo05">{{статья|автор= Прохорова И. М., Фомичёва П. Н., Ковалёва М. И. и др.|заглавие=Особенности пространственной динамики мутагенной активности воды р. Которосль и оз. Неро|оригинал=|ссылка=|автор издания=|издание=Современные проблемы биологии, экологии, хмимии|тип=Региональный сборник научных трудов|место=Ярославль|издательство=|год=2005|выпуск=|том=|номер=|страницы=118—119|isbn=}}</ref>
<ref name="Const82">{{статья|автор=Constantin M.J., Owens E.T. |заглавие=Introduction and perspectives of plant genetic and cytogenetic assay |оригинал= |ссылка= |автор издания= |издание=Mutat. Res. |тип= |место= |издательство= |год=1982 |выпуск= |том= |номер= |страницы=1—12 |isbn=}}</ref>
<ref name="WHO">{{статья|автор=WHO |заглавие=World Health Organization monographs on selected medicinal plants |оригинал= |ссылка= |автор издания= |издание=World Health Organization |тип= |место=Geneva |издательство= |год=1999 |выпуск= |том=1 |номер= |страницы= |страниц = 289 isbn=}}</ref>
<ref name="PEST">{{статья |автор= Magda I. Soliman |заглавие= Genotoxicity testing of neem plant (Azadirachta indica A. Juss) using the Allium cepa chromosome aberration assay |издание= Biological Science |ссылка= http://docsdrive.com/pdfs/ansinet/jbs/2001/1021-1027.pdf |издательство= Asian Network for science information |год= 2001 |номер= 1(11) |страницы= 1021—1027 |9=  |archivedate= 2016-03-04 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20160304115746/http://docsdrive.com/pdfs/ansinet/jbs/2001/1021-1027.pdf }}</ref>
<ref name="WHO2">{{статья |автор= Cotelle S., Masfaraud J.F., Férard J.F. |заглавие= Assessment of the genotoxicity of contaminated soil with the Allium/Vicia-micronucleus and the Tradescantia-micronucleus assays |издание= Mutat. Res. |ссылка= https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10350593 |место=  |издательство= Elsevier B.V. |год= 1999 |номер= 426 (2) |страницы= 167—171 |10=  |archivedate= 2014-02-22 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20140222000336/http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10350593 }}</ref>
<ref name="FARMA">{{статья |автор= Abu, Ngozi E. and Mba, K. C. |заглавие= Mutagenecity testing of phamarceutical effluents on Allium cepa root tip meristems |издание= Toxicology and Environmental Health Sciences |ссылка= http://www.academicjournals.org/JTEHS/PDF/Pdf2011/February/Abu%20and%20Mba.pdf |тип=  |место=  |издательство= Academic journals |год= 2011 |номер= 3(2) |страницы= 44—51 |11=  |archivedate= 2020-09-13 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20200913041447/https://academicjournals.org/JTEHS/PDF/Pdf2011/February/Abu%20and%20Mba.pdf }}</ref>
<ref name="Joe">{{статья|автор= Joe Hin Tio, Levan A. |заглавие= Chromosome number of man |издание= Heredias | ссылка= |место= |издательство= |год=1956 |номер= 42 |страницы= 1—6 |}}</ref>
<ref name="levan1929">{{статья|автор= A. Levan |заглавие= Zahil und Anordnung der Chromosomen in der Meiosis von Allium |издание= Heredias | ссылка= |место= |издательство= |год=1929 |номер= 13 |страницы= 80—86 |}}</ref>
<ref name="levan1938">{{статья|автор= A. Levan |заглавие= The effect of colchicine on root mitoses in Allium |издание= Heredias | ссылка= |место= |издательство= |год=1938 |номер= 24 |страницы= 9—26 |}}</ref>
<ref name="Science">{{статья|автор= JOHN HENRY SCHAFFNER |заглавие= The nature and distribution of attraction-spheres and centrosomes in vegetable cells |издание= Bot. Gaz | ссылка=https://archive.org/details/biostor-209461|место= |издательство= |год=1894 |номер= 19 |страницы= [https://archive.org/details/biostor-209461/page/n445 445]—459 |}}</ref>
<ref name="Science2">{{статья|автор= JOHN HENRY SCHAFFNER |заглавие= Karyokinesis in the root tips of Allium cepa |издание= Bot. Gaz | ссылка=https://archive.org/details/biostor-211266|место= |издательство= |год=1898 |номер= 26 |страницы= 225—238 |}}</ref>
<ref name="levan1949">{{статья|автор= A. Levan |заглавие= The influence on chromosomes and mitosis of chemicals, as studied by the Allium test |издание= Heredias | ссылка= |место= |издательство= |год=1949 |номер= 35 |страницы= 325—337 |}}</ref>
<ref name="levan1931">{{статья|автор= A. Levan |заглавие= Cytological studies in Allium. A preliminary note |издание= Heredias | ссылка= |место= |издательство= |год=1931 |номер= 15 |страницы= 347—356 |}}</ref>
<ref name="Blakeslee">{{статья|автор= Blakeslee A. F., Avery A. G. |заглавие= Methods of inducing chromosome doubling in plants by treatment with colchicine |издание= Science | ссылка= |место= |издательство= |год=1937 |номер= 86 |страницы= 408 | |язык= en }}</ref>
<ref name="Nebel">{{статья|автор= Nebel, В. R. |заглавие= Mechanism of polyploidy through colchicine |издание= Nature | ссылка= |место= |издательство= |год=1937 |номер= 140 |страницы= 1101 | |язык= en }}</ref>
<ref name="NATURE">{{статья|автор= ALBERT LEVAN |заглавие= Cytological Reactions Induced by Inorganic Salt Solutions |издание= Nature | ссылка= http://www.nature.com/nature/journal/v156/n3973/pdf/156751a0.pdf |место= London |издательство= Nature Publishing Group |год=1945 |номер= 156 |страницы= 751—752 | |язык= en }}</ref>
<ref name="Karl">{{статья|автор=Karl Sax|заглавие=The Behavior of X-Ray Induced Chromosomal Aberrations in Allium Root Tip Cells|ссылка=https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1209135/pdf/418.pdf|издание=Getetics|тип=статья|место=Harvard University|издательство=|год=1941|номер=26(4)|страницы=418—425|archivedate=2022-01-23|archiveurl=https://web.archive.org/web/20220123220055/https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1209135/pdf/418.pdf}}</ref>
<ref name="amato">{{статья|автор= D`Amato F. |заглавие= The quantitative study of mitotic poisons by the Allium Cepa test: Data and problems |издание= Protoplasma | ссылка= |место= |издательство= |год=1949 |номер= 39 |страницы= 423—433 |}}</ref>
<ref name="vanderlyn">{{статья|автор= Vanderlyn L. |заглавие= Somatic mitosis in the root tip of Allium cepa – a review and a reorientation |издание= The Botanical Review | ссылка= |место= |издательство= |год=1948 |номер= 14 |страницы= 270—318 |}}</ref>
<ref name="grant">{{статья|автор= Grant W.F. |заглавие= Chromosome aberration assays in Allium |издание= Mutat. Res. | ссылка= |место= |издательство= |год=1982 |номер= 99 |страницы= 273—291 |}}</ref>
<ref name="rank1993">{{статья|автор= Rank J., Nielsen M.H. |заглавие= A modified Allium test as a tool in the screening of thegenotoxicity of complex mixtures |издание= Hereditas | ссылка= |место= |издательство= |год=1993 |номер= 18 |страницы= 49—53 |}}</ref>
<ref name="rank2003">{{статья|автор= Rank J. |заглавие= The method of Allium anaphase-telophase chromosome aberration assay |издание= Ekologija | ссылка= |место= |издательство= |год=2003 |номер= 418 |страницы= 38—42 |}}</ref>
<ref name="ma">{{статья|автор= Ma T.-H., Xu Z., Xu C., McConnell H. |заглавие= The improved Allium/Vicia root tip micronucleus assay for clastogenicity of environmental pollutants |издание= Mutat. Res. | ссылка= |место= |издательство= |год=1995 |номер= 334 |страницы= 185—195 |}}</ref>
<ref name="leme2">{{статья|автор= Leme D.M., Marin-Morales M.A. |заглавие= Chromosome aberration and micronucleus frequencies in Allium cepa cells exposed to petroleum polluted water—a case study |издание= Mutat. Res. | ссылка= |место= |издательство= |год=2008 |номер= 650 |страницы= 80—86 |}}</ref>
<ref name="pluto">{{статья |автор= Dmitry S. Pesnya, Anton V. Romanovsky |заглавие= Comparison of cytotoxic and genotoxic effects of plutonium-239 alpha particles and mobile phone GSM 900 radiation in the Allium cepa test |ссылка= http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1383571812002914 |тип=  |место=  |издательство= Mutation Research |год= 2013 |номер= 750 |страницы= 27—33 |10=  |издание=  |archivedate= 2012-11-03 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20121103220605/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1383571812002914 }}</ref>
<ref name="WATER2">{{статья |автор= Barbério A, Barros L, Voltolini JC, Mello ML. |заглавие= Evaluation of the cytotoxic and genotoxic potential of water from the River Paraíba do Sul, in Brazil, with the Allium cepa L. test |издание= Braz. J. Biol. |ссылка= http://www.scielo.br/pdf/bjb/v69n3/v69n3a10.pdf |тип=  |место=  |издательство=  |год= 2009 |номер= 69(3) |страницы= 837—842 |11=  |archivedate= 2013-07-09 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20130709005609/http://www.scielo.br/pdf/bjb/v69n3/v69n3a10.pdf }}</ref>
<ref name="Navarrete">{{статья|автор= Navarrete, M.H., Carrera, P., De Miguel, M., De la Torre, C. |заглавие= A fast comet assay variant for solid tissue cells. The assessment of DNA damage in higher plants |издание= Mutat. Res. | ссылка= |место= |издательство= |год=1997 |номер= 389 |страницы= 271—277 |}}</ref>
<ref name="Seth">{{статья|автор= Seth C.S., Misra V., Chauhan L.K.S., Singh R.R. |заглавие= Genotoxicity of cadmium on root meristem cells of Allium cepa: cytogenetic and Comet assay approach |издание= Ecotox. and Environ. Saf. | ссылка= |место= |издательство= |год=2008 |номер= 71 |страницы= 711—716 |}}</ref>
<ref name="Yildiza">{{статья|автор= Yildiza M., Ciğerci I.H., Konuk M., Fidan A.F. |заглавие= Determination of genotoxic effects of copper sulphate and cobalt chloride in Allium cepa root cells by chromosome aberration and comet assays |издание= Chemosph. | ссылка= |место= |издательство= |год=2009 |номер= 375 |страницы= 934—938 |}}</ref>
<ref name="Bandyopadhyay">{{статья|автор= Bandyopadhyay A., Mukherjee A. |заглавие= Sensitivity of Allium and Nicotiana in cellular and acellular comet assays to assess differential genotoxicity of direct and indirect acting mutagens |издание= Ecotox. and Environ. Saf. | ссылка= |место= |издательство= |год=2011 |номер= 74 |страницы= 860—865 |}}</ref>
<ref name="Umu">{{статья |автор= J. Kwasniewska, G. NaŁęcz-Jawecki, A. Skrzypczak, G.A. PŁaza, M. Matejczyk |заглавие= An assessment of the genotoxic effects of landfill leachates using bacterial and plant tests |ссылка= http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651311002648 |тип=  |место=  |издательство= Ecotoxicology and Environmental Safety |год= 2012 |номер= 75 |страницы= 55—62 |10=  |издание=  |archivedate= 2011-12-24 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20111224172539/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651311002648 }}</ref>
<ref name="OECD">{{статья |автор= S.H. Doak, B. Manshian, G.J.S. Jenkins, N. Singh |заглавие= In vitro genotoxicity testing strategy for nanomaterials and the adaptation of current OECD guidelines |ссылка= http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1383571811002786 |тип=  |место=  |издательство= Mutation Research |год= 2012 |номер= 745 |страницы= 104—111 |10=  |издание=  |archivedate= 2011-12-24 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20111224191620/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1383571811002786 }}</ref>
<ref name="NANO2">{{статья|автор=Manosij Ghosh, Maumita Bandyopadhyay, Anita Mukherjee|заглавие=Genotoxicity of titanium dioxide (TiO2) nanoparticles at two trophic levels:Plant and human lymphocytes|издание=Chemosphere|ссылка=http://www.ibcmt.com/2011-01-11-IBCMT-TiO2-NanoparticlesToxicity-Chemosphere-2010.pdf|тип=|место=|издательство=Elsevier B.V.|год=2010|номер=|страницы=1253—1262|11=|archiveurl=https://web.archive.org/web/20160411095951/http://ibcmt.com/2011-01-11-IBCMT-TiO2-NanoparticlesToxicity-Chemosphere-2010.pdf|archivedate=}}</ref>
<ref name="INPS">{{статья|автор=International programme on chemical safety|заглавие=Envinromental health criteria. Nicel|ссылка=http://www.bvsde.ops-oms.org/bvsacg/e/cd-cagua/guias/b.parametos/4.BasTox/IPCS/093.pdf|издание=|тип=|место=|издательство=INCHEM|год=|страницы=|archiveurl=https://web.archive.org/web/20140221214638/http://www.bvsde.ops-oms.org/bvsacg/e/cd-cagua/guias/b.parametos/4.BasTox/IPCS/093.pdf|archivedate=2014-02-21}}</ref>
<ref name="IMPro88">{{книга |автор=Прохорова И.М. |часть= |заглавие=Растительные тест-системы для оценки мутагенов |оригинал= |ссылка=https://sites.google.com/site/alliumtestpublic/Books/WareHouse/PlantTestSystemForGradeMutagens |ответственный=Сост. И.М. Прохорова |издание= |место=Ярославль |издательство=ЯрГУ |год=1988 |том= |страницы= |страниц=13 |серия= |isbn= |тираж= |archivedate=2016-06-02 |archiveurl=https://web.archive.org/web/20160602111352/https://sites.google.com/site/alliumtestpublic/Books/WareHouse/PlantTestSystemForGradeMutagens }}</ref>
<ref name="PLANT">{{статья|автор= Paola Poli, Annamaria Buschini, Francesco Maria Restivo, Antonella Ficarelli, Francesca Cassoni1, Iliana Ferrero and Carlo Rossi |заглавие= Comet assay application in environmental monitoring: DNA damage in human leukocytes and plant cells in comparison with bacterial and yeast tests |издание= Mutagenesis | ссылка= http://mutage.oxfordjournals.org/content/14/6/547.full.pdf |место= Oxford University Press |издательство= Oxford Journals |год=1999 |номер=14(6) |страницы= 547—556 |}}</ref>
<ref name="Ivanov71">{{статья|автор=Иванов В.Б. |заглавие=Клеточные основы роста растений |оригинал= |ссылка= |автор издания= |издание= |тип= |место=Москва |издательство=Наука |год=1974 | страниц= 223 | выпуск= |том= |номер= |страницы= 231 |}}</ref>
<ref name="Tarasov94">{{статья|автор=Тарасов В. А.|заглавие=Принципы количественной оценки генетической опасности химических загрязнителей биосферы|оригинал=|ссылка=|автор издания=|издание=Мутагены и канцерогены в окружающей среде: новые подходы к оценке риска для здоровья|тип=|место=|издательство=СПб|год=1998|выпуск=|том=|номер=|страницы=92—117|isbn=}}</ref>
<ref name="Grodz">{{статья|автор=С. А. Мамедли, академик НАН Украины Д. М. Гродзинский|заглавие=Роль типа опыления в проявлении радиационно-индуцированной нестабильности генома у растений|ссылка=http://www.nbuv.gov.ua/portal/all/reports/2007-07/07-07-27.pdf|издание=Доповідi Національної академії наук України|тип=|место=|издательство=Национальная Академия Наук Украины|год=2007|номер=7|страницы=165—170|archivedate=2013-07-02|archiveurl=https://web.archive.org/web/20130702215943/http://www.nbuv.gov.ua/portal/all/reports/2007-07/07-07-27.pdf}}</ref>
<ref name="RomanPesnya">{{Cite web |url=https://sites.google.com/site/alliumtestpublic/eXPerience/ToPrint |title=''Романовский А., Песня Д., Прохорова И.'' Мутагенное действие мобильного телефона // перечень публикаций |access-date=2010-12-13 |archive-date=2016-06-03 |archive-url=https://web.archive.org/web/20160603215540/https://sites.google.com/site/alliumtestpublic/eXPerience/ToPrint |deadlink=no }}</ref>
<ref name="PesnyaRoman">{{статья |автор=Песня Д.С., Романовский А.В., Прохорова И.М. |заглавие=Разработка методики для оценки влияния УВЧ излучения сотовых телефонов и других приборов с ЭМИ на организмы in vivo |оригинал= |ссылка=http://vestnik.yspu.org/releases/2010_e3g/19.pdf |автор издания= |издание=[[Ярославский педагогический вестник]] |тип= |место=Ярославль |издательство=ЯГПУ им. К.Д. Ушинского |год=2010 |выпуск= |том=3 (Естественные науки) |номер=3 |страницы=80—84 |страниц=issn=1813-145X |archivedate=2020-09-13 |archiveurl=https://web.archive.org/web/20200913045103/http://vestnik.yspu.org/releases/2010_e3g/19.pdf }}</ref>
{{sfn|Песня и др.|2011|c=34-45|name="PesRom"}}
<ref name="Ciferka">{{статья|автор= Mirta Tkalec, Krešimir Malarić, Mirjana Pavlica, Branka Pevalek-Kozlina and Željka Vidaković-Cifrek |заглавие=Effects of radiofrequency electromagneti fields on seed germination and root meristematic cells of Allium cepa L |издание={{Нп3|Mutation Research (журнал)|Mutation Research||Mutation Research (journal)}} |тип= |место= |издательство= Elsevier B.V. |год=2009 |номер= 642(2) |страницы=76—81 }}</ref>
<ref name="OIA">{{статья |автор=Olorunfemi D., Iogieseri U. M., Akinboro A. |заглавие=Genotoxicity Screening of Industrial Effluents using Onion bulbs (''Allium cepa'' L.) |ссылка=http://www.ajol.info/index.php/jasem/article/viewFile/65700/53388 |издание=Appl. Sci. Environ. |тип= |место= |издательство=JASEM |год=2011 |страницы=211—216 |archivedate=2016-03-04 |archiveurl=https://web.archive.org/web/20160304201420/http://www.ajol.info/index.php/jasem/article/viewFile/65700/53388 }}</ref>
<ref name="NDEA">{{статья |автор=de Rainho CR, Kaezer A, Aiub CA, Felzenszwalb I. |заглавие=Ability of Allium cepa L. root tips and Tradescantia pallida var. purpurea in N-nitrosodiethylamine genotoxicity and mutagenicity evaluation |ссылка=http://www.scielo.br/pdf/aabc/v82n4/15.pdf |издание=An. Acad.Bras. Cienc. |тип= |место= |издательство= |год=2010 |страницы=925—932 |archivedate=2013-07-09 |archiveurl=https://web.archive.org/web/20130709011430/http://www.scielo.br/pdf/aabc/v82n4/15.pdf }}</ref>
<ref name="NANO">{{статья|автор=K. Klancnik, D. Drobne, J. Valant, J. Dolenc Koc|заглавие=Use of a modiﬁed Allium test with nanoTiO2|издание=Ecotoxicology and Environmental Safety|ссылка=http://www.bionanoteam.com/upload/docs/Klancnik_et_al_Ecotox_Env_Safe_2010.pdf|тип=|место=|издательство=Elsevier B.V.|год=2010|номер=|страницы=}}{{Недоступная ссылка|date=Август 2018 |bot=InternetArchiveBot }}</ref>
<ref name="NANO3">{{статья|автор=K. Babu, M. Deepa, S. G. Shankar & S. Rai |заглавие=Effect of Nano-Silver on Cell Division and Mitotic Chromosomes: A Prefatory Siren |издание=The Internet Journal of Nanotechnology |ссылка=http://www.ispub.com/journal/the_internet_journal_of_nanotechnology/volume_2_number_2_63/article/effect_of_nano_silver_on_cell_division_and_mitotic_chromosomes_a_prefatory_siren.html |тип= |место= |издательство=ISPUB |год=2008 |номер= |страницы= |archiveurl= https://web.archive.org/web/20111023160732/http://www.ispub.com/journal/the_internet_journal_of_nanotechnology/volume_2_number_2_63/article/effect_of_nano_silver_on_cell_division_and_mitotic_chromosomes_a_prefatory_siren.html |archivedate=}}</ref>
<ref name="FARMA2">{{статья |автор= Aganović-Musinović I, Todić M, Becić F, Kusturica J. |заглавие= Genotoxicity evaluation of paracetamol applying Allium test |издание= Medical Arh. |ссылка= https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15526585 |тип=  |место=  |издательство=  |год= 2004 |номер= 58(4) |страницы= 206—209'''??''' |11=  |archivedate= 2016-05-20 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20160520054136/http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15526585 }}</ref>
<ref name="Inula">{{статья |автор=Aşkin Celik T., Aslantürk O.S. |заглавие=Evaluation of cytotoxicity and genotoxicity of Inula viscosa leaf extracts with Allium test |ссылка=https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2896651/pdf/JBB2010-189252.pdf |издание=J. Biomed. Biotechnol. |тип= |место= |издательство= |год=2010 |страницы= |archivedate=2022-01-23 |archiveurl=https://web.archive.org/web/20220123204826/https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2896651/pdf/JBB2010-189252.pdf }}</ref>
<ref name="NATURE3">{{статья |автор= G. GIACOMELLO, P. MALATESTA & G. QUAGLIA |заглавие= Action of Thalidomide on Radical Meristems of Allium cepa |издание= Nature |ссылка= http://www.nature.com/nature/journal/v201/n4922/abs/201940a0.html |место= London |издательство= Nature Publishing Group |год= 1964 |номер= 201 |страницы= 940—941 |10=  |язык= en |archivedate= 2009-05-03 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20090503193206/http://www.nature.com/nature/journal/v201/n4922/abs/201940a0.html }}</ref>
<ref name="NATURE4">{{статья|автор= LEOPOLD REJNIAK & HALINA PIOTROWSKA |заглавие= Effect of Malachite Green, Congo Red and Safranin on Cell Division in Gemmae of Allium cepa |издание= Nature | ссылка= http://www.nature.com/nature/journal/v205/n4977/pdf/2051241a0.pdf |место= London |издательство= Nature Publishing Group |год=1966 |номер= 209 |страницы= 517—518 | |язык= en }}</ref>
<ref name="WATER">{{статья |автор= Sandra Radić,, Draženka Stipaničev, Valerija Vujčić, Marija Marijanović Rajčić,Siniša Širac, Branka Pevalek-Kozlina |заглавие= The evaluation of surface and wastewater genotoxicity using the Allium cepa test |издание= Science of the Total Environment |ссылка= http://bib.irb.hr/datoteka/435535.STOTEN11701.pdf |тип=  |место=  |издательство= Elsevier B.V. |год= 2009 |номер= 408 |страницы= 1228—1233 |11=  |archivedate= 2012-11-24 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20121124020322/http://bib.irb.hr/datoteka/435535.STOTEN11701.pdf }}</ref>
<ref name="Coal">{{статья |автор= Reginaldo Geremias, Tiago Bortolotto, Danilo Wilhelm-Filho, Rozangela Curi Pedrosa, Valfredo Tadeu de Fávere |заглавие= Efficacy assessment of acid mine drainage treatment with coal mining waste using Allium cepa L. as a bioindicator |ссылка= http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651311004672 |тип=  |место=  |издательство= Ecotoxicology and Environmental Safety |год= 2012 |номер= 79 |страницы= 116—121 |10=  |издание=  |archivedate= 2015-09-24 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20150924162840/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651311004672 }}</ref>
<ref name="BIOTOX">{{статья|автор= D. Lerda, M. Biagi Bistoni, P. Pelliccioni & N. Litterio |заглавие= Allium cepa as a biomonitor of ochratoxin A toxicity and genotoxicity |издание= Plant biology |ссылка= http://www.sertox.com.ar/img/item_full/Lerda,%20OTA.pdf |тип= |место= |издательство= |год= 2010 |номер= 58(4) |страницы= |11= |archiveurl= https://web.archive.org/web/20160507045510/http://www.sertox.com.ar/img/item_full/Lerda,%20OTA.pdf |archivedate= 2016-05-07}}</ref>
<ref name="BIOTOX2">{{статья |автор= W.M. Howell, G.E. Keller III, J.D. Kirkpatrick, R.L. Jenkins, R.N. Hunsinger and E.W. McLaughlin |заглавие= Effects of the plant steroidal hormone, 24-epibrassinolide, on the mitotic index and growth of onion (Allium cepa) root tips |издание= Genet. Mol. Res. |ссылка= http://www.funpecrp.com.br/gmr/year2007/vol1-6/pdf/gmr0259.pdf |тип=  |место= Samford University |издательство= GMR |год= 2007 |номер= 6(1) |страницы= 50—58 |11=  |archivedate= 2014-03-28 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20140328080823/http://www.funpecrp.com.br/gmr/year2007/vol1-6/pdf/gmr0259.pdf }}</ref>
<ref name="NATURE2">{{статья|автор= M. ANNUNCIATA McMANUS |заглавие= Certain Mitotic Effects of Kinetin, Gibberellic Acid, Indoleacetic Acid, and Maleic Hydrazide on the Root of Allium cepa |издание= Nature | ссылка= http://www.nature.com/nature/journal/v185/n4705/pdf/185044b0.pdf |место= London |издательство= Nature Publishing Group |год=1960 |номер= 185 |страницы= 44—45 | |язык= en }}</ref>
<ref name="Blue">{{статья |автор= Haywood Dail Laughinghouse IV, Daniel Prá, Maria Estela Silva-Stenico, Alexandre Rieger, Viviane Dal-Souto Frescura, Marli Fátima Fiore, Solange Bosio Tedesco |заглавие= Biomonitoring genotoxicity and cytotoxicity of Microcystis aeruginosa (Chroococcales, Cyanobacteria) using the Allium cepa test |ссылка= http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S004896971200808X |тип=  |место=  |издательство= Science of The Total Environment |год= 2012 |номер= 432 |страницы= 180—188 |10=  |издание=  |archivedate= 2015-09-24 |archiveurl= https://web.archive.org/web/20150924161054/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S004896971200808X }}</ref>

<ref name="Pesnya">{{статья|автор=Песня Д.С., Романовский А.В.|заглавие=Митоз в растительной клетке: норма и патология|ссылка=http://jre.cplire.ru/jre/library/4conf/docs/pdffiles/atlas.wmv|издание=|тип=Научно-практические пособие|место=Москва|издательство=JRE – ИРЭ им. В.А.Котельникова РАН|год=2010|страницы=929|archivedate=2012-02-11|archiveurl=https://web.archive.org/web/20120211091752/http://jre.cplire.ru/jre/library/4conf/docs/pdffiles/atlas.wmv}}</ref>
<ref name="Roman">{{статья|автор=Романовский А.В., Песня Д.С., |заглавие=Эффективное использование электронных таблиц на примере генотоксикологических исследований проб воды |оригинал= |ссылка= |автор издания= |издание=Биология внутренних вод: Материалы XIV международной школы-конференции молодых учёных |тип= |место=Борок, ИБВВ им. И.Д. Папанина РАН |издательство=Принтхаус |год=2010 |выпуск= |том= |номер= |страницы=120—127 |страниц = isbn=978-5-904234-18-8}}</ref>
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=5|name=Pro03-5}}
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=12|name=Pro03-12}}
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=13|name=Pro03-13}}
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=14|name=Pro03-14}}
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=14-15|name=Pro03-14-15}}
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=17|name=Pro03-17}}
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=15-21|name=Pro03-15-21}}
{{sfn|Прохорова и др.|2003|с=21|name=Pro03-21}}
}}

== Литература ==
* {{статья|автор=Песня Д.С., Романовский А.В., Прохорова И.М., Артёмова Т.К., Ковалева М.И., Фомичева А.Н., Соколов С.А., Кондакова Е.С., Шешина К.А., Вакорин С.А.|заглавие=Исследование биологического эффекта модулированного УВЧ излучения на растительных и животных организмах in vivo|издание=Биомедицинские технологии и радиоэлектроника|тип=статья|место=Москва|издательство=Радиотехника|год=2011|номер= 4|страницы=|ref=Песня и др.}}
* {{книга|автор= И.М. Прохорова, М.И. Ковалева, А.Н. Фомичева|заглавие=Оценка митотоксического и мутагенного действия факторов окружающей среды|ссылка=https://sites.google.com/site/alliumtestpublic/Books/MetodOfScience/OSProhorova03|издание=Методические указания|место=Ярославль|издательство=[[Ярославский государственный университет имени П. Г. Демидова|{{comment|Яросл. гос. ун-т.|Ярославский государственный университет имени П. Г. Демидова}}]]|год=2003|страниц=32|тираж=100|ref=Прохорова и др.}}
* Elena Bonciu, Peter Firbas, Carmem S. Fontanetti, Jiang Wusheng, Mehmet Cengiz Karaismailoğlu, Donghua Liu, Felicia Menicucci, Dmitry S. Pesnya, Aurel Popescu, Anton V. Romanovsky, Silvia Schiff, Joanna Ślusarczyk, Cleiton P. de Souza, Alka Srivastava, Anca Sutan & Alessio Papini '''An evaluation for the standardization of the Allium cepa test as cytotoxicity and genotoxicity assay''' // '''Caryologia''', 2018, vol. 71 (3), p 191-209.
* {{статья|автор=Fiskesjö, Geirid|заглавие=Биотестирование с помощью лука обыкновенного|оригинал=[https://web.archive.org/web/20071225193800/embryo.ib.amwaw.edu.pl/invittox/prot/8.htm Protocol № 8. Allium test]|ссылка=http://www.masters.donntu.edu.ua/2006/feht/fomina/library/article5a.htm|язык=ru|место=Швеция|издательство=Институт генетики Лундского университета|год=сентябрь 1989|издание=|archiveurl=https://web.archive.org/web/20120314051749/http://www.masters.donntu.edu.ua/2006/feht/fomina/library/article5a.htm|archivedate=}}
* {{статья|автор=Fiskesjö, Geirid|заглавие=Allium screening test|оригинал=Fiskesjo G., The Allium test as a standard in environmental monitoring, Hereditas., V. 102, 1985, pp. 99‑112|ссылка=http://alliumtest.blogspot.com/2011/05/allium-skreening-test-allium-screening.html|язык=ru|место=Швеция|издательство=Институт генетики Лундского университета|год=сентябрь 1989}}

[[Категория:Ана-телофазный метод]]
[[Категория:Хромосомные перестройки]]
[[Категория:Медицинская генетика]]
[[Категория:Метафазный метод]]